姜黄素反抗鼻咽癌作用研究

　　姜黄素是从中药姜黄根中提取的一种酚类化合物，是姜黄的重要活性成分。目前姜黄素体内抗肿瘤作用的研究重要集中在肿瘤的化学预防方面，利用姜黄素治疗荷鼻咽癌移植瘤动物的研究未见报道。本实验视察了姜黄素对人鼻咽癌CNE2ZH5细胞株体外增殖的影响，同时用姜黄素对荷瘤鼠进行治疗，探讨姜黄素抗肿瘤的作用。

　1 材料与方法

　1.1 细胞及造就系统

　CNE2ZH5：人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z的克隆亚系，广东医学院病理教研室分别并保存。CNE2ZH5细胞亚系于惯例RPMI1640造就液中，置于37℃、5%CO2造就箱内惯例造就，实验所用细胞均处于对数生长期细胞，存活率>95%。

　1.2 实验药物

　姜黄素（粉剂，购自杭州绿天公司，纯度95%以上），溶解于少量二甲亚砜（DMSO），置-20℃冰箱保存。

　1.3 实验动物

　BALB/cnu小鼠由广东医学院实验动物中心SPF裸鼠室供给。于隔离室恒温环境的层流架中饲养，饲以高压灭菌的水和饲料。鼠龄为6～8周，体重18～25g，雌雄兼有，实验时随机分配至各组。

　1.4 方法

　1.4.1 姜黄素对人鼻咽癌CNE2ZH5细胞株增殖的影响

　采用MTT比色法检测姜黄素对CNE2ZH5细胞克制率的影响。采用台盼蓝拒染法检测姜黄素对CNE2ZH5细胞生长曲线的影响。

　1.4.2 姜黄素对人CNE2ZH5细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用研究

　将制备好的浓度为5×106/ml的细胞悬液，以0.3ml/只（1.5×106个/只）注射接种于裸鼠右侧背部皮下，全部操纵过程在SPF室内进行。将接种后的24只裸鼠随机分为3组，每组8只，分辨为Ⅰ组：阴性对照组（等剂量溶剂）；Ⅱ组：实验组（姜黄素）低剂量组（25mg/kg）；Ⅲ组：高剂量组（50mg/kg）。 裸鼠接种24h后开端给药，对照组（水溶液）：Ⅰ组含等量溶剂的水溶液按0.1ml/10g腹腔注射，1次/隔日×20次。实验组（姜黄素）Ⅱ组25mg/kg体重，Ⅲ组： 50mg/kg体重，均按0.1ml/10g腹腔注射，1次/隔日×20次。

　盘算肿瘤近似体积(V)：V=(ab2)/2（a为肿瘤最大直径，b为横径），以视察天数为横坐标，以肿瘤近似体积为纵坐标，绘制肿瘤生长曲线。治疗结束后第2d，脱颈处逝世全部裸鼠，剥离瘤块，称瘤重。按以下公式盘算治疗组的抑瘤率：抑瘤率(%)=（1-治疗组均匀瘤重/对照组均匀瘤重）×100%

　1.5 统计学分析

　数据材料统计采用统计学软件SPSS11.0。根据材料类型和选用单因素方差分析(OneWay ANOVA)。

　2 成果

　2.1 姜黄素对CNE2ZH5细胞增殖的克制作用

　MTT法检测姜黄素对CNE2ZH5细胞增殖的克制率。不同浓度姜黄素可以不同程度的克制CNE2ZH5细胞增殖，同一时间点各实验组细胞克制率相比较差别有统计学意义（P<0.05），并且随着姜黄素浓度的增高，克制率也逐渐增长，表现出明显的剂量效应关系。

　F检验：在同一时间领域内，各组间差别有极明显性P<0.0012.2 姜黄素对CNE2ZH5细胞生长曲线的影响

　对照组和不同浓度姜黄素处理组细胞的生长曲线都随着造就时间的延伸而浮现逐渐上升趋势。但是与对照组比较，不同浓度姜黄素处理组的细胞，生长均受到不同程度的克制，曲线右移，上升平缓且变得逐渐低平。从第1～5d，各组细胞数比较，差别均有极明显性（P<0.001）。

　　2.3 姜黄素对CNE2ZH5细胞裸鼠移植瘤生长的影响

　大体视察，对照组的移植瘤瘤体大，多呈分叶状，灰白色，质地柔软，可见包膜，易剥离，肿瘤表面血管丰富，清楚可见，表面未见出血和坏逝世。用药组的移植瘤瘤体体积较对照组有所减小，表面血管较少，可见出血和坏逝世。高剂量姜黄素组出血坏逝世尤为明显，有的瘤体中心大部分坏逝世，可见空腔，只残留周边一圈肿瘤实体组织。各组裸鼠的瘤块剥离后,分辨称裸鼠瘤块重量，低、高剂量姜黄素组的抑瘤率分辨为26.19%和59.75%，各组裸鼠瘤块重量比较差别有明显性（P<0.05）。

　3 讨论

　以上体外实验显示了较低浓度的姜黄素（10μmol/L）就能够克制人鼻咽癌细胞株CNE2ZH5的生长，并浮现剂量效应关系，与文献报道姜黄素作用于其他肿瘤细胞系成果类似。有报道以为，姜黄素超过必定的浓度除了克制细胞增殖外，还有细胞毒作用[5]。在本实验中也创造，姜黄素在80μmol/L作用H5细胞24h后，在颠倒显微镜下视察到H5细胞质内空泡和颗粒增多，圆形和不规矩细胞增多，细胞边界含混，大批细胞脱落，造就液中涌现很多的悬浮细胞和碎片，表明此时姜黄素不仅克制H5细胞的增殖，还具有细胞毒作用，有明显的体外杀伤作用。

　药物体外实验只是评价药物的初步实验，大批研究证实药物对异种移植的人体肿瘤的作用与药物的临床疗效有良好的相干性。因此，为了进一步验证姜黄素对鼻咽癌生长克制作用的效应，我们将H5细胞接种到裸鼠背部皮下，建立了人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行体内实验。实验成果也初步提示了姜黄素对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长也具有必定的克制作用，且不良反响小，进一步比较系统的阐明了姜黄素对鼻咽癌CNE2ZH5细胞株在体内外均具有抗增殖作用。

　姜黄素在体外细胞实验及体内动物实验均显示了对鼻咽癌的良好抑瘤效应，但姜黄素是否也能有效公道的利用于鼻咽癌患者的临床治疗还需要进行更多深进过细的研究。目前姜黄素已成了国内外学者的一个研究热门，在国际上发表的论文数也逐年递增，但因姜黄素存在水溶性差，其水溶液不稳固，生物利用度较低的毛病，也限制了其在临床上的利用。现在已经开端对姜黄素构效关系,衍生物的合成，剂型的开发等方面进行深进研究,以期获得更大水溶性，高稳固性，药理活性强，给药方便，具有高效、低毒的新型药物。这将使姜黄素具有更良好的利用远景和实用价值，使人们能充分有效地利用这一自然资源。

(编辑:刘辉)

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